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完整的基因链熔断为两条单链。
当降温后,聚合酶就会自动融合到每一条单链基因上,生成互补链,又变成一个完整的基因链。
通过不断重复该步骤,就能让较少的目标基因大量复制,从而克隆出较高的浓度。
这台加热仪就是公司利用PCR技术原理,自行研发的,可以精确地控制温度在极短的时间内快速升温和降温。
等托盘收入扩增仪内,吉梅开始输入加热程序。
早前的实验,完全遵循了PCR技术发明人的操作方法,将温度升高至96摄氏度,以熔断基因链。
但是这样的高温,会破坏连接基因的聚合酶,需要重新添加聚合酶。有了人的参与,实验的稳定性就无法得到保障,失败率很高。
因此重新设计的实验,就是要利用提取的各种聚合酶,来实验它的极限生存温度,以找到一种能够在90摄氏度以上高温仍然具备相当活性的耐热聚合酶。
9号实验的,就是一种在火山温泉内找到的耐热细菌,提取的聚合酶。
而本次实验的方式,其实就是一次完整的PCR实验。
只是选择的是任意一种已知基因序列的基因片段,来作为实验模板。通过实验以后的基因序列对比,来确认聚合酶是否参与了工作,通过浓度高低,来判定它的活性。
前期实验的几十种聚合酶,大都失败,完全没有进行基因复制。个别参与复制的浓度又过低,基本上不具有实用价值。
说实话,能不能找到一种耐热聚合酶,吉梅也没有信心。
但她分到的任务,就是寻找合适的聚合酶。所以不管能不能出成果,她都必须得做下去,直到将所有收集的聚合酶测试完毕,然后提交报告。
加热程序输入完毕,吉梅按下启动按钮,然后就在旁边静静等待结果。
从读数盘上,可以看到加热仪内温度迅速提升到了95摄氏度。这也是熔断基因链的最低温度,再低就无法熔断基因链,也就无法进行下一步的操作。
两分钟后,温度又从95度,提升到了98度。
吉梅非常紧张。
这是让DNA和模板彻底分离的最关键步骤,如果能够熬过这个温度,那后面的都不是问题。
好在加热仪只在98度维持了十秒钟,就迅速降温至58度。
正常情况下,聚合酶就开始和单链相融合了。
等待了一分钟以后,温度开始急剧下降,回复到1度的低温状态,这也是长期保存的温度。
由于注入的浓度足够观察,没有重复扩增,只做了一次就结束了整个过程。
托架弹出,吉梅用戴着无菌手套的手,取出试管。
接下来,经过琼脂糖凝胶制备、注入染料、电泳取样,对样品进行检测。
国内传统的检测都是通过显微镜观察,实验室配备的进口仪器,具备了自动检测功能。
很快,一份检测报告就通过打印机,打印了出来。
吉梅撕下打印纸,放到面前一看,顿时一愣,忍不住用手揉了揉眼睛,然后再低头看去,随即就呆住了,迟迟没有动作。(未完待续)
完整的基因链熔断为两条单链。
当降温后,聚合酶就会自动融合到每一条单链基因上,生成互补链,又变成一个完整的基因链。
通过不断重复该步骤,就能让较少的目标基因大量复制,从而克隆出较高的浓度。
这台加热仪就是公司利用PCR技术原理,自行研发的,可以精确地控制温度在极短的时间内快速升温和降温。
等托盘收入扩增仪内,吉梅开始输入加热程序。
早前的实验,完全遵循了PCR技术发明人的操作方法,将温度升高至96摄氏度,以熔断基因链。
但是这样的高温,会破坏连接基因的聚合酶,需要重新添加聚合酶。有了人的参与,实验的稳定性就无法得到保障,失败率很高。
因此重新设计的实验,就是要利用提取的各种聚合酶,来实验它的极限生存温度,以找到一种能够在90摄氏度以上高温仍然具备相当活性的耐热聚合酶。
9号实验的,就是一种在火山温泉内找到的耐热细菌,提取的聚合酶。
而本次实验的方式,其实就是一次完整的PCR实验。
只是选择的是任意一种已知基因序列的基因片段,来作为实验模板。通过实验以后的基因序列对比,来确认聚合酶是否参与了工作,通过浓度高低,来判定它的活性。
前期实验的几十种聚合酶,大都失败,完全没有进行基因复制。个别参与复制的浓度又过低,基本上不具有实用价值。
说实话,能不能找到一种耐热聚合酶,吉梅也没有信心。
但她分到的任务,就是寻找合适的聚合酶。所以不管能不能出成果,她都必须得做下去,直到将所有收集的聚合酶测试完毕,然后提交报告。
加热程序输入完毕,吉梅按下启动按钮,然后就在旁边静静等待结果。
从读数盘上,可以看到加热仪内温度迅速提升到了95摄氏度。这也是熔断基因链的最低温度,再低就无法熔断基因链,也就无法进行下一步的操作。
两分钟后,温度又从95度,提升到了98度。
吉梅非常紧张。
这是让DNA和模板彻底分离的最关键步骤,如果能够熬过这个温度,那后面的都不是问题。
好在加热仪只在98度维持了十秒钟,就迅速降温至58度。
正常情况下,聚合酶就开始和单链相融合了。
等待了一分钟以后,温度开始急剧下降,回复到1度的低温状态,这也是长期保存的温度。
由于注入的浓度足够观察,没有重复扩增,只做了一次就结束了整个过程。
托架弹出,吉梅用戴着无菌手套的手,取出试管。
接下来,经过琼脂糖凝胶制备、注入染料、电泳取样,对样品进行检测。
国内传统的检测都是通过显微镜观察,实验室配备的进口仪器,具备了自动检测功能。
很快,一份检测报告就通过打印机,打印了出来。
吉梅撕下打印纸,放到面前一看,顿时一愣,忍不住用手揉了揉眼睛,然后再低头看去,随即就呆住了,迟迟没有动作。(未完待续)